p53 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423509-ACT

Das murine Trp53 kodiert den Transkriptionsfaktor p53, einen zentralen Regulator der Genomintegrität, der DNA-Schäden, onkogenen Stress und metabolische Signale integriert, um Zellzyklusarrest, Seneszenz, Apoptose und DNA-Reparatur zu koordinieren. Die p53-Aktivität überschneidet sich mit der ATM/ATR–CHK-Signalgebung, der negativen Rückkopplungsschleife über MDM2 sowie Signalwegen, die oxidativen Stress und die mitochondriale Homöostase steuern. Eine Störung oder Abschwächung der p53-Signalgebung ist für die Tumorbiologie breit relevant und beeinflusst experimentelle Ergebnisse in Studien zu genotoxischem Stress, Chromatinregulation und immunmodulatorischen Genprogrammen. In murinen Modellsystemen wird die gezielte Anpassung der Trp53-Expression häufig genutzt, um Mechanismen der Stressanpassung und transformationsassoziierte Phänotypen zu untersuchen.

p53 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Trp53-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

p53 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Trp53-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Trp53-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen p53-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Trp53-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von p53-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des p53-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Trp53-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.