Plasmide CRISPR d'Activation (m) p38 alpha MAPK14: sc-424051-ACT

Mapk14 code pour p38 alpha (MAPK14), une kinase sérine/thréonine activée par le stress, qui intègre les cytokines inflammatoires, les signaux des récepteurs de type Toll et le stress environnemental au sein de cascades de phosphorylation contrôlant la transcription, la stabilité des ARNm et la traduction des protéines. Dans les cellules murines, p38 alpha régule ATF2, ELK1 et des modules kinasiques en aval tels que MAPKAPK2/3, modulant la production de médiateurs dont le TNF et l’IL-6, et influençant les points de contrôle du cycle cellulaire ainsi que l’apoptose. Cette voie s’articule avec la signalisation NF-κB et celle des interférons, reliant l’activité de MAPK14 aux réponses immunitaires innées et à l’homéostasie tissulaire. Une signalisation p38 dérégulée est largement utilisée comme nœud mécanistique dans des modèles de maladie inflammatoire, de stress métabolique, de neuroinflammation et de signalisation microenvironnementale associée au cancer.

p38 alpha MAPK14 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mapk14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p38 alpha MAPK14 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mapk14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mapk14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p38 alpha MAPK14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mapk14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p38 alpha MAPK14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p38 alpha MAPK14 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mapk14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.