Plasmide Double Nickase (h) P2Y7: sc-403664-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) P2Y7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide P2Y7 Double Nickase (h) et le plasmide P2Y7 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LTB4R. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) P2Y7 | sc-403664-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) P2Y7 | sc-403664-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LTB4R code le récepteur 1 du leucotriène B4 (BLT1), un récepteur couplé aux protéines G qui transmet les signaux du leucotriène B4 afin d’activer le flux de Ca2+ via PLCβ, les cascades MAPK et des programmes chimiotactiques dépendants de PI3K dans les cellules myéloïdes et d’autres cellules immunitaires. La signalisation de BLT1 coordonne l’adhésion, la migration et la dégranulation des leucocytes, reliant la détection des médiateurs lipidiques à la régulation des réseaux inflammatoires. Une activité dérégulée de LTB4R a été associée à des phénotypes d’inflammation chronique et à des lésions tissulaires d’origine immunitaire dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies des leucotriènes. En recherche biomédicale, la perturbation de LTB4R permet d’examiner le trafic cellulaire piloté par les GPCR, la libération de cytokines et les interactions avec le métabolisme des eicosanoïdes et la signalisation de l’immunité innée.
P2Y7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LTB4R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LTB4R. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LTB4R. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LTB4R.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.