Plasmide CRISPR d'Activation (m) Ox40: sc-423560-ACT

Le gène murin **Tnfrsf4** code **OX40 (CD134)**, un récepteur co‑stimulatoire inductible de la superfamille du TNFR, exprimé principalement par les lymphocytes T activés et par certains sous‑ensembles de lymphocytes T régulateurs. La liaison d’OX40 par **OX40L** favorise l’expansion clonale, la survie et la différenciation effectrice via une signalisation dépendante des **TRAF** convergeant vers les voies **NF‑κB**, **MAPK** et **PI3K–AKT**, ce qui soutient la production de cytokines et la formation de cellules mémoire. Une signalisation OX40 dérégulée est impliquée dans des processus inflammatoires et auto‑immuns, et façonne le contexte immunitaire tumoral en modifiant la persistance des lymphocytes T et les réseaux suppresseurs. Par conséquent, **Tnfrsf4** est largement étudié pour les seuils d’activation des lymphocytes T, le soutien des centres germinatifs et le remodelage du microenvironnement immunitaire dans des modèles murins de maladie.

Ox40 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tnfrsf4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ox40 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tnfrsf4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tnfrsf4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ox40. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tnfrsf4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ox40 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ox40 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tnfrsf4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.