Plasmide CRISPR d'Activation (m) OX2R: sc-425439-ACT

Le gène murin *Cd200r1* code OX2R (récepteur CD200 1), un récepteur immunorégulateur inhibiteur exprimé principalement par les cellules de la lignée myéloïde, notamment les macrophages, les cellules dendritiques et la microglie. La liaison d’OX2R à son ligand CD200 favorise une signalisation dépendante des ITIM, qui recrute des phosphatases telles que SHP-1/2 afin d’atténuer les cascades pro-inflammatoires, limitant ainsi la production de cytokines, l’activation des phagocytes et les fonctions de présentation d’antigènes. Par ces voies, *Cd200r1* contribue au maintien de la tolérance immunitaire et de l’homéostasie tissulaire aux sites barrières et au sein du système nerveux central. La dérégulation de la signalisation CD200–OX2R a été impliquée dans des modèles de neuroinflammation, d’auto-immunité, d’immunopathologie associée aux infections et d’échappement immunitaire tumoral, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de la biologie des checkpoints myéloïdes.

OX2R Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cd200r1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OX2R Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cd200r1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cd200r1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OX2R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cd200r1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OX2R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OX2R dans les cellules tumorales présentant une expression de Cd200r1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.