OX2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403573-ACT

CD200 (OX2) è una glicoproteina di membrana di tipo I appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, che agisce come ligando di checkpoint immunitario tramite l’interazione con CD200R su cellule mieloidi e altre cellule immunitarie. Questo asse di segnalazione sopprime l’attivazione pro‑infiammatoria, influenza la produzione di citochine e favorisce la tolleranza immunitaria nei microambienti tissutali, intersecandosi con vie che regolano la polarizzazione di macrofagi e microglia. L’espressione di CD200 è ampiamente rilevante per la comunicazione neuro‑immunitaria, la regolazione delle risposte infiammatorie e le interazioni tumore–sistema immunitario. La disregolazione della segnalazione CD200–CD200R è stata associata a condizioni infiammatorie e neuroinfiammatorie e, nella ricerca in biologia del cancro, a fenotipi di evasione immunitaria.

OX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD200 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD200 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD200, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD200 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OX2 nelle cellule tumorali con espressione di CD200 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.