OTUD2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432624

Descripción general

Yod1 codifica OTUD2, una enzima desubiquitinante de la familia OTU que hidroliza cadenas de ubiquitina para regular la estabilidad de las proteínas y la amplitud de la señalización. OTUD2 participa en el control dependiente de ubiquitina de la proteostasis y de vías de señalización sensibles al estrés, incluidos circuitos inflamatorios e inmunitarios innatos, donde la ubiquitinación ajusta la activación y la terminación de las vías. Al remodelar las señales de ubiquitina, OTUD2 puede influir en decisiones de supervivencia celular, respuestas al daño del ADN y programas transcripcionales vinculados a la homeostasis celular. La edición desregulada de ubiquitina se ha implicado en biología del cáncer y en mecanismos de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario, lo que convierte a Yod1/OTUD2 en un nodo útil para diseccionar vías en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OTUD2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Yod1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Yod1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Yod1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OTUD2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Yod1 para la investigación de la señalización de OTUD2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Yod1 críticos para la función de OTUD2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Yod1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OTUD2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido OTUD2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Yod1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OTUD2 (m) y el plásmido HDR OTUD2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Yod1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Yod1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.