OTUD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432624-ACT

O gene murino **Yod1** codifica a desubiquitinase **OTUD2**, uma enzima com domínio OTU que edita cadeias de ubiquitina para modular a estabilidade de proteínas e a saída de sinalização. A atividade de OTUD2 está associada ao controle, dependente de ubiquitina, de vias inflamatórias e de resposta ao estresse, incluindo a modulação da sinalização de **NF-κB** e da proteostase sob estresse do retículo endoplasmático (RE). Ao ajustar os estados de ubiquitinação dos componentes das vias, Yod1 pode influenciar a dinâmica da sinalização imune inata, a apoptose e a homeostase celular. A desregulação da sinalização por ubiquitina e da proteostase está amplamente implicada em patologias mediadas pelo sistema imune, neurodegeneração e biologia do câncer, tornando OTUD2 um nó útil para estudos mecanísticos de edição de ubiquitina em contextos relevantes para doenças.

OTUD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Yod1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OTUD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Yod1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Yod1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OTUD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Yod1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OTUD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OTUD2 em células tumorais com expressão de Yod1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.