Plasmide Double Nickase (m) OTUB1: sc-430702-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) OTUB1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide OTUB1 Double Nickase (m) et le plasmide OTUB1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Otub1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: OTUB1 Antibody (J-61): sc-130458
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) OTUB1 | sc-430702-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) OTUB1 | sc-430702-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Otub1 de souris code OTUB1, une déubiquitinase de la famille « ovarian tumor » (OTU) qui remodèle l’architecture des chaînes d’ubiquitine et inhibe la signalisation dépendante de l’ubiquitine. OTUB1 régule la protéostasie et les réponses au stress en modulant l’ubiquitination liée à K48 et à K63, avec des rôles bien établis dans la réponse aux dommages de l’ADN via la régulation de la signalisation ubiquitine au niveau des cassures double brin. En façonnant le flux des voies médiées par l’ubiquitine, OTUB1 influence la progression du cycle cellulaire, la stabilité du génome et les sorties de signalisation inflammatoire. Une activité d’OTUB1 dérégulée a été associée à une signalisation aberrante dans des voies pertinentes pour le cancer ainsi qu’à des modifications de processus immunitaires et neurobiologiques, ce qui soutient son étude dans des contextes de modélisation des maladies.
OTUB1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Otub1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Otub1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Otub1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Otub1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.