Plasmide Double Nickase (h) OTUB1: sc-407665-NIC

OTUB1 (OTU deubiquitinase, ubiquitin aldehyde binding 1) est une déubiquitinase de type protéase à cystéine qui clive préférentiellement les chaînes d’ubiquitine liées en K48 et peut aussi inhiber les enzymes E2 de conjugaison de l’ubiquitine, façonnant ainsi les sorties de signalisation dépendantes de l’ubiquitine. Par ces activités, OTUB1 régule la stabilité des protéines et la dynamique des signaux dans des voies contrôlant la réponse aux dommages de l’ADN, la progression du cycle cellulaire et la signalisation du stress, notamment via la modulation de composants de la voie p53 et d’événements d’ubiquitination associés à la réparation. L’ajustement, dépendant d’OTUB1, de la protéostasie dépendante de l’ubiquitine influence des nœuds de signalisation immunitaires et inflammatoires et peut affecter le renouvellement de protéines régulatrices clés. Une expression ou une activité d’OTUB1 dérégulée a été rapportée dans de multiples contextes de cancers ainsi que dans d’autres troubles où l’homéostasie de l’ubiquitine et le maintien du génome sont perturbés, ce qui soutient son intérêt comme cible mécanistique dans des recherches axées sur les voies de signalisation.

OTUB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus OTUB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de OTUB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de OTUB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de OTUB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.