Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (m) osteopontin/OPN/SPP1: sc-423134-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)osteopontin/OPN/SPP1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa osteopontin/OPN/SPP1 (m) y el plásmido de doble nickasa osteopontin/OPN/SPP1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Spp1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: osteopontin/OPN/SPP1 Anticuerpo (AKm2A1): sc-21742
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) osteopontin/OPN/SPP1 | sc-423134-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) osteopontin/OPN/SPP1 | sc-423134-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Spp1 codifica la osteopontina (OPN/SPP1), una fosfoglucoproteína secretada que también actúa en la matriz extracelular para regular la adhesión, la migración y la supervivencia celulares. La OPN interactúa con integrinas y con CD44 para coordinar la señalización a través de adhesiones focales y de vías asociadas a MAPK/PI3K, modulando el reclutamiento de leucocitos, la activación de macrófagos y la remodelación tisular. En sistemas murinos, Spp1 se utiliza ampliamente como marcador y como nodo mecanístico en inflamación, fibrosis, biología de los osteoclastos y remodelación del nicho metastásico. La expresión desregulada de OPN/SPP1 se examina con frecuencia en modelos de enfermedad inflamatoria crónica, interacciones tumor–estroma y recambio óseo.
osteopontin/OPN/SPP1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Spp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Spp1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Spp1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Spp1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.