osteopontin/OPN/SPP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423134-ACT

O gene murino **Spp1** codifica a osteopontina (OPN/SPP1), uma fosfoglicoproteína secretada que também se associa à matriz extracelular para regular a adesão, a migração e a sobrevivência celulares. A OPN sinaliza por meio de integrinas e CD44 para modular a dinâmica das adesões focais, a remodelação do citoesqueleto e vias a jusante como PI3K–AKT, MAPK e NF-κB, moldando respostas inflamatórias e de remodelação tecidual. É produzida por células da linhagem osteoblástica, macrófagos e outros compartimentos estromais/imunes, contribuindo para a mineralização óssea, o recrutamento de células imunes e a remodelação da matriz associada à fibrose. A expressão desregulada de **Spp1** é frequentemente associada a distúrbios inflamatórios, à biologia de invasão/metástase do câncer e à fisiopatologia esquelética e renal em modelos murinos de doença.

osteopontin/OPN/SPP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Spp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

osteopontin/OPN/SPP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Spp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Spp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de osteopontin/OPN/SPP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Spp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de osteopontin/OPN/SPP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via osteopontin/OPN/SPP1 em células tumorais com expressão de Spp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.