Plasmide CRISPR d'Activation (h) Osteoglycin: sc-403018-ACT

OGN code pour l’ostéoglycine, un petit protéoglycane riche en leucines de la matrice extracellulaire qui se lie aux fibrilles de collagène et module l’assemblage matriciel, la résistance mécanique des tissus et la signalisation cellule–matrice. L’ostéoglycine influence la disponibilité des facteurs de croissance et la signalisation via leurs récepteurs dans les compartiments stromaux, reliant le remodelage de la matrice extracellulaire à des programmes cellulaires tels que l’adhésion, la migration et la différenciation. Une expression altérée d’OGN a été associée à un remodelage fibrotique et à une dérégulation du renouvellement de la matrice extracellulaire, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes tels que le remodelage cardiovasculaire, la biologie du stroma tumoral et la réparation des plaies. Ces fonctions font d’OGN une cible utile pour analyser comment la composition et l’organisation de la matrice façonnent l’homéostasie tissulaire et les microenvironnements associés aux maladies.

Osteoglycin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OGN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Osteoglycin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OGN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OGN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Osteoglycin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OGN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Osteoglycin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Osteoglycin dans les cellules tumorales présentant une expression de OGN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.