Plasmide CRISPR/Cas9 KO OSC (m): sc-421475

Présentation

Lss code l’oxidosqualène cyclase (OSC), une enzyme clé associée au réticulum endoplasmique qui cyclise le 2,3‑oxidosqualène en lanostérol, orientant ainsi le flux métabolique vers la branche des stérols de la voie du mévalonate. En contrôlant la biosynthèse des stérols, l’OSC influence la composition en cholestérol des membranes, l’organisation des radeaux lipidiques et, en aval, la capacité stéroïdogène. Les perturbations du métabolisme des stérols sont largement associées à une dérégulation de l’homéostasie lipidique et à l’activation de programmes de stress cellulaire, faisant de Lss un point d’entrée pertinent pour étudier le remodelage métabolique dans des contextes physiologiques et liés aux maladies. Dans des modèles murins, l’inactivation de Lss/OSC offre une approche maniable pour examiner comment les contraintes imposées à la voie des stérols affectent la croissance cellulaire, la différenciation et les réseaux de signalisation sensibles à la composition lipidique des membranes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OSC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lss dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lss, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lss à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OSC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lss pour l'étude de la signalisation de OSC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lss essentiels à la fonction de OSC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lss pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OSC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le OSC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lss. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OSC plasmide HDR (m) et le OSC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lss pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lss définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.