Plasmide Double Nickase (h) ORMDL3: sc-403587-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ORMDL3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ORMDL3 Double Nickase (h) et le plasmide ORMDL3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ORMDL3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ORMDL3 | sc-403587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ORMDL3 | sc-403587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ORMDL3 (orosomucoïde‑like 3) est une protéine membranaire du réticulum endoplasmique qui régule la biosynthèse des sphingolipides en modulant l’activité de la sérine palmitoyltransférase, influençant ainsi l’homéostasie des céramides et la signalisation médiée par les lipides. Par son rôle dans le métabolisme lipidique du RE, ORMDL3 affecte les réponses au stress du RE, la gestion du calcium et les voies de signalisation inflammatoires qui déterminent les états d’activation cellulaire. Une expression altérée d’ORMDL3 et les déséquilibres lipidiques associés ont été liés à une dérégulation immunitaire et à des phénotypes d’inflammation des voies aériennes, ce qui en fait une cible fréquente dans les études sur la susceptibilité à l’asthme et des traits inflammatoires apparentés. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation d’ORMDL3 offre un moyen d’analyser comment le flux des sphingolipides s’articule avec les programmes induits par les cytokines, la composition membranaire et les voies d’adaptation au stress.
ORMDL3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ORMDL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ORMDL3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ORMDL3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ORMDL3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.