Plasmide Double Nickase (h) Orai1: sc-400901-NIC

ORAI1 code pour Orai1, la sous-unité formant le pore du canal calcique activé par la déplétion des réserves de calcium (CRAC), qui assure l’entrée de Ca²⁺ dépendante des stocks (store-operated Ca²⁺ entry) après épuisement des réserves de Ca²⁺ du réticulum endoplasmique. Orai1 coopère avec STIM1 pour coupler la détection du Ca²⁺ dans le RE à l’ouverture du canal de la membrane plasmique, modulant ainsi les signaux calciques cytosoliques qui régulent la transcription dépendante de NFAT, les programmes d’activation cellulaire et l’homéostasie du calcium. Cette voie est centrale pour la signalisation des cellules immunitaires, la sécrétion et, plus largement, pour des processus régulés par le calcium tels que la prolifération et la migration. Une activité d’ORAI1 dérégulée a été associée à des dysfonctionnements immunitaires et à des phénotypes inflammatoires, et des altérations de la signalisation de l’influx de Ca²⁺ ont été étudiées dans des contextes incluant la myopathie et des réseaux de signalisation associés au cancer.

Orai1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ORAI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ORAI1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ORAI1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ORAI1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.