Particules Lentivirales d'Activation (h) OR2A1: sc-417340-LAC

OR2A1 code un récepteur olfactif appartenant à la famille des GPCR de classe A de type rhodopsine, qui participe à la détection des odorants via le couplage à la signalisation des protéines G et à des voies de transduction dépendantes des nucléotides cycliques. Bien que sa caractérisation soit surtout issue des neurones sensoriels olfactifs, l’expression ectopique de récepteurs olfactifs a été rapportée dans de nombreux tissus, ce qui a motivé des études sur leurs rôles dépendants du contexte dans la communication cellulaire. L’activité d’OR2A1 peut influencer la signalisation en aval via des seconds messagers ainsi que des programmes transcriptionnels liés à la perception sensorielle et à la régulation chimiosensorielle. Une signalisation GPCR dérégulée et des profils d’expression des récepteurs altérés sont largement pertinents pour l’étude de l’inflammation, du métabolisme et de la biologie du cancer, où les membres de la famille des récepteurs olfactifs sont de plus en plus analysés comme marqueurs moléculaires.

Les particules d'activation lentivirales OR2A1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de OR2A1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales OR2A1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription OR2A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de OR2A1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif OR2A1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.