Plasmide CRISPR d'Activation (h) Oct-6: sc-401826-ACT

POU3F1 (Oct-6) code un facteur de transcription à domaine POU qui régule la spécification des lignages et les programmes de différenciation, avec des rôles marqués dans les cellules dérivées de la crête neurale et le développement des cellules de Schwann. Oct-6 module des réseaux transcriptionnels contrôlant la sortie du cycle cellulaire, l’expression de gènes associés à la myélinisation et le calendrier du développement, via la liaison à des promoteurs/activateurs (enhancers) et la coopération avec d’autres régulateurs transcriptionnels. Une activité dérégulée de POU3F1 a été associée à des états de différenciation aberrants et à une capacité proliférative altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des voies du neurodéveloppement, de la biologie gliale et de la plasticité cellulaire pilotée par des facteurs de transcription. Dans des modèles cellulaires humains, Oct-6 constitue un nœud permettant d’explorer les circuits de régulation génique sous-jacents aux décisions de destinée cellulaire et à la transcription en réponse au stress.

Oct-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POU3F1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Oct-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POU3F1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POU3F1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Oct-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POU3F1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Oct-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Oct-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de POU3F1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.