Plásmido Doble Nickase (m) Nurr1: sc-421994-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Nurr1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nurr1 (m) y el plásmido de doble nickasa Nurr1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Nr4a2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nurr1 Anticuerpo (F-5): sc-376984
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Nurr1 | sc-421994-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Nurr1 | sc-421994-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Nr4a2 codifica Nurr1, un factor de transcripción receptor nuclear huérfano esencial para el desarrollo, el mantenimiento y la resiliencia al estrés de las neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo en el ratón. Nurr1 regula programas génicos que controlan la síntesis y el transporte de dopamina, la homeostasis mitocondrial y la señalización antiinflamatoria, integrándose con redes transcripcionales impulsadas por receptores nucleares. También modula las respuestas microgliales y astrocitarias mediante la represión de la expresión de genes proinflamatorios, configurando la homeostasis neuroinmunitaria. La desregulación de las vías dependientes de Nurr1 se ha implicado en la neurodegeneración y la disfunción sináptica, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en modelos de fenotipos parkinsonianos y otros fenotipos neurológicos relacionados.
Nurr1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nr4a2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nr4a2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nr4a2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nr4a2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.