Particules Lentivirales d'Activation (h) Nup88: sc-404091-LAC

NUP88 code pour Nup88, un composant central du complexe du pore nucléaire (NPC) qui contribue au transport nucléocytoplasmique en organisant l’architecture du NPC et en modulant le trafic des cargos à travers l’enveloppe nucléaire. Nup88 participe à des voies impliquées dans l’export des ARNm, l’import/export des protéines, la progression du cycle cellulaire et la signalisation en réponse au stress, via des interactions avec d’autres nucléoporines et des récepteurs de transport. Des altérations de l’expression ou de la localisation de NUP88 ont été associées à une perturbation de l’homéostasie du transport nucléaire et à une régulation anormale de programmes transcriptionnels influençant la prolifération et la différenciation. Ces caractéristiques font de NUP88 une cible utile pour étudier la biologie du pore nucléaire, la signalisation couplée au transport et les mécanismes reliant le dysfonctionnement du NPC à des phénotypes cellulaires pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales Nup88 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NUP88 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Nup88 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NUP88, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Nup88. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NUP88 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.