Plasmide CRISPR d'Activation (m) Nup133: sc-433405-ACT

Nup133 chez la souris code un composant structural central du complexe du pore nucléaire (NPC), au sein du sous-complexe Nup107–160, qui sert d’échafaudage à l’assemblage des pores nucléaires et soutient le transport nucléocytoplasmique. En contribuant à l’organisation de l’architecture du NPC, Nup133 influence le trafic des ARN et des protéines, la progression du cycle cellulaire et la dynamique de l’enveloppe nucléaire, notamment sa réassemblage après la mitose. Une perturbation de la composition du NPC peut modifier les programmes d’expression génique à l’échelle globale en raison d’un transport altéré des facteurs de transcription et de la machinerie de maturation des ARN. En tant que nucléoporine centrale, Nup133 est fréquemment étudiée dans des contextes reliant le transport nucléaire et l’intégrité de l’enveloppe nucléaire à des phénotypes développementaux et aux réponses cellulaires au stress.

Nup133 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nup133 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nup133 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nup133 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nup133, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nup133. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nup133 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nup133 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nup133 dans les cellules tumorales présentant une expression de Nup133 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.