Plasmide CRISPR d'Activation (m) NUDT5: sc-424768-ACT

Le gène murin *Nudt5* code NUDT5, une hydrolase de type Nudix qui régule l’homéostasie des métabolites nucléotidiques en hydrolysant l’ADP-ribose et des dérivés apparentés, influençant ainsi la disponibilité des substrats pour l’ADP-ribosylation et la signalisation en aval. En contrôlant les réserves de nucléotides et le renouvellement de l’ADP-ribose, NUDT5 intervient dans des processus liés aux réponses aux dommages de l’ADN, à la régulation de la chromatine et à l’adaptation au stress cellulaire. Une altération du métabolisme de l’ADP-ribose a été associée à une prolifération dérégulée et à des voies de maintien du génome perturbées, faisant de *Nudt5* une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans d’autres troubles impliquant une réparation de l’ADN déficiente et une reprogrammation métabolique. Dans des modèles murins, la perturbation de *Nudt5* permet d’étudier comment la signalisation nucléotidique influence les programmes transcriptionnels et les transitions d’état cellulaire.

NUDT5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nudt5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NUDT5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nudt5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nudt5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NUDT5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nudt5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NUDT5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NUDT5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Nudt5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.