NSUN2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405097-ACT

NSUN2 (metiltransferase de RNA NOP2/Sun 2) codifica uma metiltransferase de RNA citosina-5 que instala m5C em diversos substratos de RNA, incluindo tRNAs e mRNAs, influenciando assim a estabilidade, o processamento e a tradução do RNA. Essa atividade epitranscriptômica do RNA se cruza com a biogênese de ribossomos, a progressão do ciclo celular e programas de resposta ao estresse por meio da modulação da síntese proteica e do metabolismo de RNA. A metilação dependente de NSUN2 está ligada ao controle da proliferação e diferenciação celulares, e suas perturbações são associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a programas de crescimento desregulados observados em múltiplos contextos de doença. Como resultado, o NSUN2 é frequentemente estudado em vias que governam o controle de qualidade de RNA, a regulação translacional e a remodelação adaptativa ao estresse da expressão gênica.

NSUN2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NSUN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NSUN2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NSUN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NSUN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NSUN2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NSUN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NSUN2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NSUN2 em células tumorais com expressão de NSUN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.