Plasmide CRISPR d'Activation (h) NSD3: sc-402721-ACT

NSD3 (également connu sous le nom de WHSC1L1) code une méthyltransférase nucléaire des lysines des histones contenant un domaine SET, qui agit comme régulateur de la chromatine des programmes transcriptionnels liés à l’identité cellulaire et à la prolifération. En déposant des marques de méthylation sur les histones et en se coordonnant avec d’autres cofacteurs épigénétiques, NSD3 contribue à l’organisation des nucléosomes, à l’activité des enhancers et à l’expression génique dépendante de l’ARN polymérase II. Une dérégulation de NSD3 a été associée à des états de chromatine altérés observés dans plusieurs cancers, notamment dans des contextes impliquant une amplification de 8p11 et une dépendance transcriptionnelle aberrante. Ces propriétés font de NSD3 une cible utile pour étudier le contrôle épigénétique de la signalisation oncogénique, des programmes de lignée et de la régulation des gènes médiée par la chromatine dans les cellules humaines.

NSD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NSD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NSD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NSD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NSD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NSD3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NSD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NSD3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NSD3 dans les cellules tumorales présentant une expression de NSD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.