Plasmide Double Nickase (m) NRAMP2: sc-421958-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NRAMP2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NRAMP2 Double Nickase (m) et le plasmide NRAMP2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc11a2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) NRAMP2 | sc-421958-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc11a2 code pour NRAMP2 (DMT1), un transporteur d’ions métalliques divalents couplé aux protons, qui assure l’entrée cellulaire du fer ferreux et d’autres métaux de transition à travers les membranes endosomales et la membrane plasmique. Dans les cellules murines, NRAMP2 permet la libération du fer depuis les endosomes de manière dépendante de la transferrine et contribue à l’absorption intestinale du fer, ce qui l’associe à l’homéostasie du fer, à l’érythropoïèse et à la régulation métabolique. L’activité de NRAMP2 s’articule avec le trafic endocytaire et des réseaux de signalisation sensibles aux métaux, qui modulent la fonction mitochondriale et les réponses au stress oxydatif. La dérégulation de Slc11a2 est associée à des phénotypes de surcharge en fer et d’anémie, et elle est largement pertinente dans des modèles de neurodégénérescence, d’inflammation et d’interactions hôte–pathogène où la disponibilité des métaux influence la fitness cellulaire.
NRAMP2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc11a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc11a2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc11a2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc11a2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.