Particules Lentivirales d'Activation (h) NRAMP 2: sc-418176-LAC

SLC11A2 code pour NRAMP2 (DMT1), un transporteur d’ions métalliques divalents couplé aux protons, qui assure l’entrée cellulaire et l’export endosomal du fer ferreux ainsi que d’autres métaux de transition. NRAMP2 joue un rôle central dans l’absorption intestinale du fer et dans la libération du fer issu du cycle de la transferrine au niveau des endosomes, ce qui le relie à l’endocytose, à l’acidification vésiculaire et aux voies d’homéostasie des métaux influençant le métabolisme mitochondrial et les réponses au stress oxydant. Une dérégulation de SLC11A2 est associée à une anémie microcytaire héréditaire avec surcharge en fer et contribue à des phénotypes de gestion du fer pertinents pour la neurodégénérescence, l’inflammation et le stress métabolique. En tant que transporteur membranaire soumis à une régulation dépendante du contexte, NRAMP2 est fréquemment étudié dans des modèles de détection des nutriments, de biologie rédox et d’interactions hôte–pathogène, où la disponibilité en métaux façonne la fonction cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales NRAMP 2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SLC11A2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NRAMP 2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SLC11A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NRAMP 2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SLC11A2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.