Plasmide CRISPR d'Activation (h) NPAS4: sc-402373-ACT

La protéine humaine NPAS4 (neuronal PAS domain protein 4) est un facteur de transcription bHLH-PAS (hélice-boucle-hélice de base/PAS) dépendant de l’activité, qui relie la dépolarisation neuronale et la signalisation calcique à des programmes transcriptionnels rapides. Elle régule l’équilibre excitation–inhibition en modulant le développement et la plasticité des synapses, en intégrant des signaux issus des voies associées à CREB et à MAPK afin de remodeler des réseaux de gènes sensibles aux stimuli. NPAS4 influence le remodelage des circuits neuronaux, la dynamique des épines dendritiques et la transcription induite par le stress, ce qui en fait un nœud clé de la plasticité dépendante de l’expérience. Une expression dérégulée de NPAS4 et de ses cibles en aval a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, notamment des altérations cognitives et une susceptibilité à des modifications de la signalisation liées aux crises et au stress.

NPAS4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NPAS4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NPAS4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NPAS4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NPAS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NPAS4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NPAS4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NPAS4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NPAS4 dans les cellules tumorales présentant une expression de NPAS4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.