Plasmide CRISPR d'Activation (m2) Nox4: sc-424443-ACT-2

Le gène murin Nox4 (NADPH oxydase 4) code une enzyme productrice d’ERO constitutivement active qui génère principalement du peroxyde d’hydrogène, façonnant la signalisation redox dans de nombreux types cellulaires. Les espèces réactives de l’oxygène dérivées de NOX4 modulent des voies telles que TGF-β/SMAD, MAPK, PI3K–AKT et NF-κB, influençant des processus comme la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire, l’apoptose et les réponses au stress, avec des rôles majeurs dans la biologie vasculaire, la fonction rénale et l’activation des fibroblastes. Une activité de Nox4 dérégulée a été associée, dans des modèles murins, à des phénotypes expérimentaux pertinents pour la fibrose, l’hypertension et le remodelage vasculaire, les dysfonctionnements métaboliques et les lésions tissulaires inflammatoires. L’édition génétique de Nox4 permet de disséquer les mécanismes d’une signalisation des ERO compartimentée, d’explorer des programmes transcriptionnels dépendants du redox et de valider les contributions de NOX4 dans des systèmes cellulaires et in vivo pertinents pour les maladies.

Nox4 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nox4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nox4 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nox4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nox4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nox4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nox4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nox4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nox4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Nox4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.