Plasmide Double Nickase (m) Notum: sc-429545-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Notum correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Notum Double Nickase (m) et le plasmide Notum Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Notum. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Notum | sc-429545-NIC | 20 µg | $410.00 |
Notum chez la souris code une carboxylestérase sécrétée qui désacyle les ligands Wnt, antagonisant ainsi la signalisation canonique Wnt/β-caténine et modulant la mise en place des tissus ainsi que des programmes transcriptionnels associés aux cellules souches. En limitant l’engagement des récepteurs Wnt par l’élimination de la modification par palmitoléate, Notum contribue à un contrôle de rétroaction extracellulaire des gradients de morphogènes et influence les décisions de destinée cellulaire au cours du développement et de l’homéostasie des tissus adultes. Une activité NOTUM altérée a été associée à une dérégulation de l’activité de la voie Wnt dans des contextes tels que le remodelage osseux, la régulation métabolique et la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des processus dépendants de Wnt. Dans des modèles murins, la perturbation de Notum permet d’examiner les interactions entre voies de signalisation influençant la prolifération, la différenciation et la signalisation de niche.
Notum Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Notum dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Notum. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Notum. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Notum.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.