Plasmide Double Nickase (h) NOS1: sc-418493-NIC

Le gène humain **NOS1** code la **nitric oxide synthase neuronale** (nNOS), une enzyme régulée par le calcium/la calmoduline qui produit du monoxyde d’azote (NO) à partir de la L-arginine et module ainsi la signalisation via le cGMP. Le NO dérivé de NOS1 régule la neurotransmission, la plasticité synaptique, le couplage neurovasculaire et le tonus du muscle lisse, avec des rôles supplémentaires dans l’homéostasie rédox via la formation d’espèces azotées réactives. Dans les cellules, l’activité de NOS1 s’intègre à l’influx de calcium dépendant des récepteurs NMDA, à la signalisation MAPK et à des complexes d’échafaudage qui localisent nNOS dans des microdomaines subcellulaires spécifiques. Une dérégulation de la signalisation de NOS1 a été impliquée dans des phénotypes neurologiques et psychiatriques, le traitement de la douleur et la régulation cardiovasculaire, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des voies dépendantes du NO.

NOS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NOS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NOS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NOS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NOS1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.