Plasmide CRISPR d'Activation (h) NOR-1: sc-401813-ACT

NR4A3 code NOR-1, un récepteur nucléaire orphelin qui agit comme un facteur de transcription à réponse immédiate, intégrant les signaux mitogènes et de stress en programmes géniques dépendants du contexte. NOR-1 influence la différenciation, la prolifération, l’apoptose et l’adaptation métabolique des cellules en modulant des réseaux transcriptionnels en aval de voies telles que MAPK/ERK et AMPc/PKA, avec des interactions avec la signalisation inflammatoire. Dans les cellules immunitaires et vasculaires, NR4A3 contribue à la régulation de l’expression de gènes sensibles aux cytokines et au changement de phénotype, ce qui soutient les études sur l’inflammation, l’angiogenèse et le remodelage tissulaire. Une activité altérée de NR4A3 et un remodelage des programmes transcriptionnels ont été associés à des processus oncogéniques et hématologiques, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude de circuits de régulation génique pertinents pour les maladies.

NOR-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR4A3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NOR-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR4A3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR4A3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NOR-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR4A3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NOR-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NOR-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NR4A3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.