Particules Lentivirales d'Activation (h) NOP2: sc-409656-LAC

Le gène humain NOP2 code une méthyltransférase nucléolaire de l’ARN impliquée dans la biogenèse des ribosomes, via la modification site-spécifique de l’ARNr et la coordination de la maturation du pré-ARNr. L’activité de NOP2 soutient l’organisation du nucléole, la progression du cycle cellulaire et la capacité de traduction, ce qui la relie à des programmes de contrôle de la croissance et à des réponses au stress cellulaire convergeant vers le métabolisme de l’ARN. Une expression dérégulée de NOP2 est fréquemment étudiée dans le contexte d’états prolifératifs, où une production ribosomale altérée peut remodeler la production protéomique et les voies de maintien du génome. Ainsi, NOP2 constitue une cible utile pour étudier la fonction nucléolaire, la traduction dépendante des modifications de l’ARNr et des mécanismes centrés sur l’ARN associés à des phénotypes oncogéniques.

Les particules d'activation lentivirales NOP2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NOP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NOP2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NOP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NOP2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NOP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.