Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Nogo Double Nickase Plasmid (h): sc-400819-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nogo Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nogo Double-Nickase-Plasmid (h) und Nogo Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RTN4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nogo: sc-271878
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nogo Double Nickase Plasmid (h) | sc-400819-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nogo Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400819-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RTN4 kodiert Nogo, ein mit dem endoplasmatischen Retikulum und der Zelloberfläche assoziiertes Protein, das vor allem dafür bekannt ist, über Interaktionen mit Nogo-Rezeptorkomplexen und die nachgeschaltete RhoA/ROCK-Signalübertragung das Neuritenauswachsen, die Axonführung und das synaptische Remodeling zu regulieren. Im zentralen Nervensystem trägt Nogo zur aktivitätsabhängigen strukturellen Plastizität bei und begrenzt nach Verletzungen das regenerative Aussprossen, wodurch RTN4 mit Signalwegen verknüpft ist, die die Zytoskelettdynamik und die Motilität des Wachstumskegels steuern. Über Neuronen hinaus ist RTN4 an der Membrankrümmung und der Organisation von ER-Tubuli beteiligt und beeinflusst dadurch den intrazellulären Transport sowie Stressantworten. Eine fehlregulierte Nogo-Signalgebung wurde im Zusammenhang mit Neurodegeneration, demyelinisierenden Erkrankungen und anderen Zuständen untersucht, bei denen axonale Konnektivität und Reparaturprozesse gestört sind.
Nogo Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RTN4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RTN4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RTN4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RTN4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.