Plasmide Double Nickase (h) Nogo: sc-400819-NIC

RTN4 code pour Nogo, une protéine associée au réticulum endoplasmique et à la surface cellulaire, surtout connue pour réguler la croissance des neurites, le guidage des axones et le remodelage synaptique via des interactions avec les complexes du récepteur de Nogo et la signalisation RhoA/ROCK en aval. Dans le système nerveux central, Nogo contribue à la plasticité structurelle dépendante de l’activité et limite le bourgeonnement régénératif après une lésion, reliant RTN4 à des voies qui contrôlent la dynamique du cytosquelette et la motilité du cône de croissance. Au-delà des neurones, RTN4 participe à la courbure membranaire et à l’organisation des tubules du RE, influençant le trafic intracellulaire et les réponses au stress. Une signalisation Nogo dérégulée a été étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence, de pathologies démyélinisantes et d’autres situations où la connectivité axonale et les processus de réparation sont perturbés.

Nogo Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RTN4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RTN4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RTN4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RTN4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.