Plásmido CRISPR de Activación (h) NOD1: sc-402402-ACT

NOD1 (dominio de oligomerización de unión a nucleótidos que contiene 1) es un receptor citosólico de reconocimiento de patrones que detecta muropéptidos derivados del peptidoglucano, en particular el ácido γ-D-glutamil-meso-diaminopimélico de bacterias gramnegativas. Tras el reconocimiento del ligando, NOD1 señaliza a través de RIPK2 para activar las vías de NF-κB y MAPK, promoviendo la transcripción de mediadores inflamatorios y modulando la barrera epitelial y las respuestas inmunitarias innatas. NOD1 también se interconecta con la autofagia, la señalización de estrés y las interacciones huésped–microbioma que influyen en la supervivencia celular y la homeostasis inmunitaria. La actividad desregulada de NOD1 se ha asociado con estados inflamatorios crónicos y patología relacionada con infecciones, lo que respalda su estudio en redes de señalización inmunitaria y en modelos de inflamación relevantes para enfermedad.

NOD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NOD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NOD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NOD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NOD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NOD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NOD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NOD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NOD1 en células tumorales con expresión de NOD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.