Plasmide Double Nickase (h) Nkx-2.5: sc-400276-NIC

NKX2-5 code Nkx-2.5, un facteur de transcription à homéoboîte qui coordonne la spécification de la lignée cardiaque et la morphogenèse en régulant des programmes génétiques contrôlant la différenciation des cardiomyocytes, le développement du système de conduction et la formation des cavités cardiaques. Il agit au sein de réseaux transcriptionnels cardiaques centraux impliquant les facteurs GATA, les protéines TBX et MEF2, afin de moduler l'activité des enhancers et des états de chromatine dépendants du contexte, pendant l'embryogenèse comme dans le myocarde adulte. Une activité NKX2-5 dérégulée ou des variants de séquence sont associés à des cardiopathies congénitales et à des phénotypes liés aux arythmies, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un nœud mécanistique clé pour l'étude de la cardiogenèse et des circuits de régulation génique cardiaques. Dans des modèles cellulaires, la transcription dépendante de Nkx-2.5 influence l'assemblage des sarcomères, la maturation électrophysiologique et des voies de remodelage sensibles au stress, pertinentes pour la biologie du développement et des maladies.

Nkx-2.5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NKX2-5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NKX2-5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NKX2-5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NKX2-5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.