NK-2R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403149

Panoramica

TACR2 codifica il recettore umano della neurochinina-2 (NK-2R), un GPCR di classe A attivato da tachichinine come la neurochinina A, che si accoppia principalmente alla segnalazione Gq/11. L’attivazione del recettore stimola la fosfolipasi Cβ con conseguente produzione di inositolo trisfosfato/diacilglicerolo, mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare e coinvolgimento delle vie PKC/MAPK, plasmando programmi trascrizionali e contrattili. NK-2R è espresso nella muscolatura liscia, nei tessuti gastrointestinali e respiratori e in specifiche popolazioni neuronali, dove regola la motilità, il tono delle vie aeree e la segnalazione infiammatoria neurogena. Una segnalazione TACR2 deregolata è stata associata a una risposta alterata della muscolatura liscia e alla modulazione di circuiti infiammatori, sostenendo il suo studio in modelli di iperreattività bronchiale di tipo asmatico, dismotilità gastrointestinale e vie neuropeptidergiche correlate al dolore.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NK-2R (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TACR2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TACR2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TACR2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NK-2R.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TACR2 per lo studio della segnalazione di NK-2R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TACR2 critici per la funzione di NK-2R
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TACR2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NK-2R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NK-2R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TACR2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NK-2R Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NK-2R (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TACR2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TACR2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.