Plasmide Double Nickase (h) Nix: sc-401982-NIC

BNIP3L code pour Nix, une protéine BH3-only de la membrane externe mitochondriale qui intègre les signaux d’hypoxie et de stress cellulaire aux mécanismes de renouvellement programmé des mitochondries. Nix favorise l’autophagie sélective des mitochondries via des régions d’interaction avec LC3 et coopère avec des programmes de mitophagie indépendants de PINK1/Parkin, soutenant le contrôle qualité mitochondrial lors de la différenciation et de l’adaptation au stress. En régulant le potentiel de membrane mitochondrial, l’homéostasie des ROS et les interactions avec la famille BCL2, Nix influence l’apoptose intrinsèque et le remodelage métabolique. Une activité dérégulée de BNIP3L/Nix a été associée à des altérations de la mitophagie et des décisions de destinée cellulaire dans des contextes tels que la neurodégénérescence, le stress cardiométabolique et la biologie des cancers, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des voies de surveillance mitochondriale.

Nix Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BNIP3L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BNIP3L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BNIP3L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BNIP3L.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.