Plasmide CRISPR d'Activation (h) NIS: sc-402298-ACT

SLC5A5 code le symporteur sodium/iodure (NIS), un transporteur de la membrane plasmique qui couple l’entrée d’iodure au gradient électrochimique du sodium afin de concentrer l’iodure à l’intérieur des cellules. L’activité de NIS soutient des processus biosynthétiques dépendants de l’iodure et influence l’équilibre rédox cellulaire ; sa régulation est liée à l’état de différenciation et à des programmes de contrôle transcriptionnel qui gouvernent l’expression des transporteurs membranaires. Une expression altérée de SLC5A5 et une mauvaise localisation ont été rapportées dans des contextes thyroïdiens et extra-thyroïdiens, où une prise en charge perturbée de l’iodure peut servir d’indicateur fonctionnel de l’identité de lignée et du trafic des transporteurs. Ces caractéristiques font de NIS un modèle utile pour étudier la biologie des transporteurs de la famille SLC, la maturation des protéines membranaires et les mécanismes transcriptionnels qui contrôlent la spécialisation épithéliale.

NIS Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC5A5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NIS Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC5A5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC5A5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NIS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC5A5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NIS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NIS dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC5A5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.