NIS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402298-ACT

SLC5A5 codifica o simportador sódio/iodeto (NIS), um transportador da membrana plasmática que acopla a captação de iodeto ao gradiente eletroquímico de sódio para concentrar iodeto no interior das células. A atividade do NIS sustenta processos biossintéticos dependentes de iodeto e influencia o equilíbrio redox celular, com regulação ligada ao estado de diferenciação e a programas de controle transcricional que governam a expressão de transportadores de membrana. Alterações na expressão de SLC5A5 e sua relocalização incorreta têm sido relatadas em contextos tireoidianos e não tireoidianos, nos quais o manuseio prejudicado de iodeto pode servir como uma leitura funcional da identidade de linhagem e do tráfego de transportadores. Essas características fazem do NIS um modelo útil para estudar a biologia de transportadores da família SLC, a maturação de proteínas de membrana e os mecanismos transcricionais que controlam a especialização epitelial.

NIS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC5A5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NIS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC5A5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC5A5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NIS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC5A5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NIS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NIS em células tumorais com expressão de SLC5A5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.