Plasmide Double Nickase (m) NGF: sc-421889-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NGF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NGF Double Nickase (m) et le plasmide NGF Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ngf. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NGF Antibody (NGF30): sc-32300
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) NGF | sc-421889-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) NGF | sc-421889-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ngf code le nerve growth factor (NGF), une neurotrophine sécrétée essentielle à la survie, à la différenciation et au maintien des neurones sympathiques et sensoriels pendant le développement ainsi que dans les tissus adultes. Le NGF transmet ses signaux principalement via NTRK1/TrkA et p75NTR afin de réguler les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ, reliant la disponibilité du ligand à la croissance des neurites, à la plasticité synaptique et aux réponses neuronales au stress. Dans des modèles murins, une altération de la signalisation du NGF est associée à des modifications de la sensibilisation des nocicepteurs, des interactions neuro-immunes et de la dynamique de l’innervation périphérique, pertinentes pour la biologie des douleurs inflammatoires et neuropathiques. Le NGF influence également des processus non neuronaux, notamment l’activité des mastocytes et le remodelage tissulaire, faisant de Ngf un nœud utile pour étudier les interactions dépendantes des neurotrophines dans des microenvironnements pertinents pour la maladie.
NGF Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ngf dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ngf. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ngf. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ngf.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.