Plasmide Double Nickase (h) NGF: sc-400292-NIC

Le facteur de croissance nerveuse (NGF) est une neurotrophine sécrétée qui se lie à la tyrosine kinase du récepteur TrkA (NTRK1) et au récepteur neurotrophine p75 (NGFR) afin de réguler la survie neuronale, la différenciation et la croissance des neurites. La signalisation du NGF mobilise les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ, en coordonnant des programmes transcriptionnels, la dynamique du cytosquelette et le maintien synaptique, dans des contextes du système nerveux périphérique et central. Au-delà du neurodéveloppement, le NGF contribue à la communication neuro-immune et peut moduler la sensibilisation des nocicepteurs ainsi que les réponses inflammatoires via une signalisation dépendante des récepteurs. Une expression ou une signalisation du NGF dérégulée a été associée à des processus neurodégénératifs, à des mécanismes de douleur chronique et à une plasticité neuronale altérée, faisant du NGF une cible largement étudiée en biologie du système nerveux.

NGF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NGF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NGF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NGF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NGF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.