Plasmide Double Nickase (h) NFKBIA/IkB alpha: sc-400034-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NFKBIA/IkB alpha correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NFKBIA/IkB alpha Double Nickase (h) et le plasmide NFKBIA/IkB alpha Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NFKBIA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: p-NFKBIA/IkB alpha Antibody (B-9): sc-8404
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NFKBIA/IkB alpha | sc-400034-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NFKBIA/IkB alpha | sc-400034-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFKBIA code pour IκBα, un régulateur inhibiteur central de la signalisation canonique de NF‑κB, qui se lie aux complexes RELA/p50 et les séquestre dans le cytoplasme jusqu’à ce qu’une phosphorylation médiée par IKK déclenche leur ubiquitination puis leur dégradation par le protéasome. Par ce mécanisme contrôlé par rétroaction, IκBα module des programmes transcriptionnels dépendants du stimulus, qui gouvernent l’inflammation, l’immunité innée et adaptative, la survie cellulaire et les réponses au stress. Une activité ou une expression dérégulée de NFKBIA a été associée à l’activation aberrante de la voie NF‑κB observée dans diverses maladies à médiation immunitaire ainsi que dans de multiples contextes cancéreux, où une signalisation altérée peut affecter les réseaux de cytokines, la résistance à l’apoptose et la signalisation du microenvironnement. En tant que nœud central des voies TNF, IL‑1, TLR et des récepteurs antigéniques, NFKBIA est fréquemment étudié pour disséquer la dynamique de NF‑κB, la rétroaction transcriptionnelle et les interactions entre voies de signalisation.
NFKBIA/IkB alpha Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NFKBIA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NFKBIA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NFKBIA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NFKBIA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.