Plásmido CRISPR de Activación (h) NF-YA: sc-401085-ACT

NFYA codifica la subunidad NF-YA del factor de transcripción heterotrimérico NF-Y, que se une a motivos tipo caja CCAAT y coordina la arquitectura del promotor con el estado de la cromatina para controlar la transcripción basal e inducible. NF-YA contribuye a la regulación de la progresión del ciclo celular, la replicación y reparación del ADN, los programas génicos metabólicos y las vías de respuesta al estrés mediante interacciones cooperativas con otros factores de transcripción y complejos coactivadores. La alteración de la actividad de NFYA o de las redes de genes diana de NF-Y se ha vinculado con proliferación y diferenciación desreguladas, con relevancia para programas transcripcionales oncogénicos y cambios más amplios en la expresión génica observados en múltiples contextos de enfermedad. Estas propiedades hacen de NFYA un nodo útil para investigar la regulación impulsada por promotores, los circuitos transcripcionales y el reconfiguramiento de vías en modelos celulares humanos.

NF-YA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NFYA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NF-YA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NFYA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NFYA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NF-YA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NFYA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NF-YA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NF-YA en células tumorales con expresión de NFYA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.