Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) NF-L: sc-402254-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) NF-L correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NF-L Double Nickase (h) et le plasmide NF-L Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NEFL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NF-L Antibody (8A1): sc-20012
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) NF-L | sc-402254-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) NF-L | sc-402254-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NEFL code la chaîne légère des neurofilaments (NF‑L), une protéine majeure des filaments intermédiaires qui s’assemble avec NEFM et NEFH pour former des neurofilaments déterminant le calibre axonal et soutenant le transport axonal à longue distance. NF‑L s’intègre aux processus de remodelage du cytosquelette qui coordonnent le trafic dépendant des microtubules et de l’actine, influençant la morphologie neuronale, les propriétés de conduction et la résistance structurelle. Une dérégulation de l’expression de NEFL, de son assemblage ou de la dynamique des filaments dépendante de la phosphorylation est associée à des axonopathies et à des phénotypes neurodégénératifs, ce qui fait de NF‑L un marqueur moléculaire largement utilisé des lésions neuronales et du stress du cytosquelette. Dans les systèmes neuronaux humains, NEFL est fréquemment étudié dans des voies régissant la croissance des neurites, le maintien synaptique et les réponses aux perturbations de la protéostase.
NF-L Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NEFL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NEFL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NEFL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NEFL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.