Plasmide CRISPR d'Activation (m) neuroglobin: sc-425686-ACT

Le gène murin **Ngb** code la neuroglobine, une globine se liant à l’hème, enrichie dans les neurones, où elle contribue à la gestion de l’oxygène, à l’homéostasie redox et à la résilience cellulaire face au stress métabolique et oxydatif. La neuroglobine a été associée à la fonction mitochondriale, au tamponnement des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et à la modulation de voies de signalisation liées à l’apoptose, qui influencent la survie neuronale. Les variations d’expression de **Ngb** ont été étudiées dans le contexte des réponses à l’hypoxie/ischémie et des programmes de stress pertinents pour la neurodégénérescence, ce qui en fait un point d’entrée utile pour disséquer les mécanismes de détection de l’oxygène et d’adaptation au stress dans le système nerveux. Dans des modèles expérimentaux, la perturbation de **Ngb** renseigne sur la manière dont la disponibilité en oxygène s’articule avec la bioénergétique mitochondriale et la transcription régulée par l’état redox.

neuroglobin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ngb sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

neuroglobin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ngb dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ngb, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de neuroglobin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ngb natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de neuroglobin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie neuroglobin dans les cellules tumorales présentant une expression de Ngb silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.