Plasmide Double Nickase (m) Neurofibromin: sc-421861-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Neurofibromin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Neurofibromin Double Nickase (m) et le plasmide Neurofibromin Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Nf1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Neurofibromin Antibody (H-12): sc-376886
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Neurofibromin | sc-421861-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Neurofibromin | sc-421861-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Nf1** code la **neurofibromine**, une protéine activatrice de l’activité GTPasique de Ras (Ras-GAP) qui atténue la signalisation RAS en accélérant la conversion de Ras-GTP (actif) en Ras-GDP (inactif). En modulant les voies **RAF–MEK–ERK** et **PI3K–AKT–mTOR**, la neurofibromine influence la prolifération, la différenciation, la survie ainsi que le développement neuronal et glial. **Nf1** affecte également l’organisation du cytosquelette et la signalisation dépendante de l’AMPc, reliant les signaux des facteurs de croissance aux décisions de destinée cellulaire. La dérégulation de la fonction de **NF1** est associée à une activation aberrante de la voie Ras et fait l’objet de nombreuses études dans les contextes de la biologie de la prédisposition tumorale et des phénotypes neurodéveloppementaux dans des modèles murins.
Neurofibromin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nf1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nf1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nf1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.