Plasmide Double Nickase (h) Neuralized-2: sc-407560-NIC

NEURL2 code Neuralized-2, une ligase E3 ubiquitine de type RING qui favorise l’ubiquitination et la dégradation de certaines protéines membranaires et de signalisation, modulant ainsi le trafic des récepteurs et la durée des signaux. Dans les cellules humaines, Neuralized-2 a été associée à la régulation de composants de la voie Notch ainsi qu’au contrôle plus large, par le système ubiquitine–protéasome, des décisions de destin cellulaire, de la polarité et des programmes de différenciation. Par ces mécanismes, l’activité de NEURL2 peut influencer l’homéostasie épithéliale et des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte en aval de signalisations développementales. Des altérations de l’expression de NEURL2 ou des perturbations de la signalisation médiée par l’ubiquitine ont été associées dans la littérature à des phénotypes liés au cancer et à une dérégulation de voies de signalisation, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques de la signalisation et des transitions d’état cellulaire.

Neuralized-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NEURL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NEURL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NEURL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NEURL2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.