Plasmide CRISPR d'Activation (h) netrin-4: sc-403229-ACT

Le gène humain **NTN4** code la **netrine-4**, un signal de guidage sécrété, apparenté aux laminines et enrichi dans les membranes basales, qui module l’adhésion cellulaire, la migration et l’organisation des tissus. La netrine-4 interagit avec des récepteurs et des composants de la matrice extracellulaire afin d’influencer les programmes de guidage axonal, la morphogenèse vasculaire et les interactions épithélio-endothéliales, avec des effets en aval sur le remodelage du cytosquelette et l’organisation de la matrice extracellulaire. Dans le système vasculaire et le système nerveux, une expression altérée de **NTN4** a été associée à une dérégulation des signaux angiogéniques, des propriétés de barrière et des processus de remodelage, en lien avec des anomalies du développement et des mécanismes complexes de maladie.

netrin-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NTN4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

netrin-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NTN4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NTN4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de netrin-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NTN4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de netrin-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie netrin-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de NTN4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.