NERF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405891
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NERF O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico NERF, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NERF Anticorpo (224C4a): sc-130632
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NERF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405891 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
ELF2 codifica o NERF, um fator de transcrição da família ETS que se liga a motivos de DNA ricos em purinas para regular programas de expressão gênica que controlam a diferenciação hematopoética, a ativação de células imunes e redes transcricionais específicas de linhagem. O NERF participa da transcrição dependente da RNA polimerase II e coopera com outros fatores de transcrição e reguladores de cromatina para modular a atividade de promotores e enhancers. A desregulação da sinalização ELF2/NERF tem sido associada a vias alteradas de proliferação e sobrevivência em contextos hematológicos, sustentando seu estudo na leucemogênese e na desregulação imune. Como fator regulatório nuclear, o NERF também é utilizado como um nó para dissecar circuitos transcricionais dirigidos por ETS e a remodelação de vias a jusante.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NERF (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ELF2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ELF2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ELF2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NERF.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ELF2 para a investigação da sinalização de NERF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ELF2 críticos para a função NERF
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ELF2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo NERF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NERF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ELF2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo NERF Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NERF (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ELF2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ELF2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.