Plásmido CRISPR de Activación (m) Nek7: sc-425603-ACT

El gen Nek7 de ratón codifica la quinasa 7 relacionada con NIMA (NIMA-related kinase 7), una quinasa de serina/treonina que favorece la progresión mitótica mediante la regulación de la función del centrosoma, la dinámica de los microtúbulos y el ensamblaje del huso mitótico. La actividad de Nek7 coordina los puntos de control del ciclo celular y la capacidad proliferativa, lo que la vincula con vías que gobiernan la estabilidad cromosómica y la fidelidad de la división celular. Más allá de la mitosis, NEK7 se ha implicado en la señalización inflamatoria a través de la activación del inflamasoma NLRP3, conectando el control del citoesqueleto dependiente de quinasas con las respuestas inmunitarias innatas. Los procesos asociados a NEK7 y su desregulación son relevantes para el estudio de la proliferación anómala, la inestabilidad genómica y la patología asociada a la inflamación en sistemas mamíferos.

Nek7 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nek7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nek7 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nek7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nek7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nek7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nek7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nek7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nek7 en células tumorales con expresión de Nek7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.