Plasmide Double Nickase (m) NEDD4: sc-421848-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NEDD4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NEDD4 Double Nickase (m) et le plasmide NEDD4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Nedd4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: NEDD4 Antibody (F-11): sc-518160
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) NEDD4 | sc-421848-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) NEDD4 | sc-421848-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Nedd4 code l’E3 ubiquitine‑ligase NEDD4, une enzyme à domaine HECT qui régule le renouvellement des protéines et l’intensité des signaux en catalysant l’ubiquitination de récepteurs membranaires, de transporteurs et d’adaptateurs de signalisation. Par ses interactions avec des substrats et des protéines adaptatrices contenant le motif PPxY, NEDD4 influence l’endocytose, le trafic vésiculaire et la protéostase, et s’inscrit à l’interface de voies telles que la signalisation EGFR/RTK, PI3K–AKT et TGF‑β/SMAD. NEDD4 module également l’abondance des canaux ioniques et des transporteurs, contribuant au transport épithélial et à l’excitabilité neuronale. Une activité de NEDD4 dérégulée a été associée dans la littérature à des altérations de la signalisation de croissance, des réponses immunitaires et inflammatoires, ainsi qu’à des phénotypes pertinents pour la biologie du cancer et les troubles du neurodéveloppement, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la régulation dépendante de l’ubiquitine.
NEDD4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nedd4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nedd4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nedd4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nedd4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.